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公共场所集中空调系统冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法

 

  冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验方法
  本附录规定了集中空调通风系统冷却水、冷凝水及其形成的沉积物、软泥等样品中嗜肺军团菌(fungus)的检验方法。
  A1原理
  待测水样经过滤膜或离心浓缩后,一部分样品经酸处理(chǔ lǐ)与热处理,以最大化减少杂菌(fungus)生长,一部分样品不作处理。将上述处理与未处理样品分别接种BCYE琼脂平板并进行培养,生成典型菌落并经生化培养和血清学实验鉴定(同义词:判定、判断、判决)确认则判定为嗜肺军团菌。
  A2 主要仪器设备
  A2.1 平皿:90mm
  A2.2 培养箱:35~37℃
  A2.3 紫外灯:波长360±2nm
  A2.4 滤膜滤器
  A2.5 滤膜:孔径(aperture)0.22~0.45μm
  A2.6 蠕动(wriggle)泵
  A2.7 离心机
  A2.8 涡旋振荡器
  A2.9 普通光学显微镜、荧光显微镜、体式镜
  A2.10 水浴箱
  A3 采样
  A3.1 采样容器:可选择玻璃瓶或聚乙烯瓶,沉积物与软泥需用广口瓶,容器均需螺口或磨口,用前灭菌(fungus)。
  A3.2 采样量:每个采样点依无菌操作取水样约200ml。
  A3.3 中和:经氯或臭氧等消毒的样品,采样容器灭菌(fungus)前加入硫代硫酸钠溶液以中和样品中的氧化物。
  A3.4 样品运输与贮存:样品最好2天内送达实验室,不必冷冻,但要避光和防止受热,室温下贮存不得超过15天。
  A4 方法与步骤
  A4.1 样品处理
  A4.1.1 沉淀或离心:如有杂质可静置沉淀或1000r/min离心1min筛除。泰州空气检测新装修或新进家具的房子尽量通风。检测时,对采用自然通风的民用建筑,门窗关闭1小时后进行检测,“氡气”则应在对外门窗关闭1小时后进行检测;对采用中央空调的,应在空调正常运转的条件下进行检测。
  A4.1.2 过滤:将经沉淀或离心的样品通过孔径0.22~0.45μm滤膜过滤,取下滤膜置于15ml灭菌水中,充分洗脱,备用。
  A4.1.3 热处理:取1ml洗脱样品置50℃水浴加热30min。泰州空气检测新装修或新进家具的房子尽量通风。检测时,对采用自然通风的民用建筑,门窗关闭1小时后进行检测,“氡气”则应在对外门窗关闭1小时后进行检测;对采用中央空调的,应在空调正常运转的条件下进行检测。
  A4.1.4 酸处理(chǔ lǐ):取5ml洗脱样品,调pH至2.2,轻轻摇匀,放置5min。
  A4.2 接种与培养:取A4.1.2洗脱样品、A4.1.3 热处理样品及A4.1.4酸处理样品各0.1ml,分别接种GVPC平板。将接种平板静置于CO2培养箱中,温度为35~37℃,CO2浓度为2.5%。无CO2培养箱可采用烛缸培养法。观察到有培养物生成时,反转平板,孵育10天,注意保湿。
  A4.3观察结果:军团菌生长缓慢,易被其它菌掩盖,需每天在体式镜上观察。军团菌的菌落颜色多样,通常呈白色、灰色、蓝色或紫色,也能显深褐色、灰绿色、深红色;菌落整齐,表面光滑,呈典型毛玻璃状,在紫外灯下,有荧光。
  A4.4菌落验证:从每一个平皿上挑取2个可疑菌落,接种BCYE和L-半光氨(化学式:NH3) 酸缺失的BCYE琼脂平板,35~37℃培养2天,凡在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板不生长的则为军团菌菌落。泰州甲醛检测操作简单、使用方便的简易检测方法的产品,也是目前最适合个人家庭检测甲醛的检测方法。体积小巧方 便放置,用于家具治理前后对比甲醛浓度,判断治理效果再方便合适不过啦!甲醛自测盒的最大特点就是消费者可以自己动手检测甲醛,操作方法简单!
  A4.5嗜肺军团菌型别的确定:应进行生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌。生化培养:氧(Oxygen)化酶,硝酸盐还原-,尿素酶-,明胶液化+,水解马尿酸(Uric acid)。血清学实验:用嗜肺军团菌诊断(diagnosis)血清进行分型。

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